# NOM-110-SSA1-1994 Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico Fuente: https://platiica.economia.gob.mx/normalizacion/nom-110-ssa1-1994/ Estado informado por la fuente: Vigente Disponibilidad local: texto - > Enlace al último Informe de revisión: - Clave de la Norma: NOM-110-SSA1-1994 - Comité que desarrolló la Norma: Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario - Dependencia(s): Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios - Estado de la Norma: Vigente - Fecha de entrada en vigor: 15/11/1995 - Fecha de publicación en el DOF: 16/10/1995 - Grado: Equivalente - Producto, servicio, proceso o sistema: Análisis microbiológico para muestras de alimentos - Título de la Norma: Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico ## PDF enlazado por la ficha oficial Tipo de publicación: pdf Relación con la ficha: principal Fuente del documento: https://platiica.economia.gob.mx/wp-content/uploads/sites/2/PDF_Normas_Publicas/110-ssa1.pdf Recuperación pendiente o parcial; consultar el archivo y la fuente original. ## NORMA Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico. Tipo de publicación: norma Relación con la ficha: principal Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4883170 [Documento con formato](/normas/nom-110-ssa1-1994/documentos/dof-4883170/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes.     Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO. JOSE MELJEM MOCTEZUMA, Director General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por acuerdo del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 38 fracción II, 47 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 8o. fracción IV y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, y CONSIDERANDO Que con fecha 28 de abril de 1994, en cumplimiento de lo previsto en el artículo 46 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, la Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios presentó al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana. Que con fecha 15 de agosto de 1994, en cumplimiento del acuerdo del Comité y lo previsto en el artículo 47 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, se publicó en el Diario Oficial de la Federación el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana a efecto que dentro de los siguientes noventa días naturales posteriores a dicha publicación, los interesados presentaran sus comentarios al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. Que en fecha previa, fueron publicadas en el Diario Oficial de la Federación las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comité, en términos del artículo 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. Que en atención a las anteriores consideraciones, contando con la aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, se expide la siguiente: NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO. PREFACIO En la elaboración de la presente norma participaron los siguientes Organismos e Instituciones: SECRETARIA DE SALUD Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios Laboratorio Nacional de Salud Pública SECRETARIA DE MEDIO AMBIENTE, RECURSOS NATURALES Y PESCA Instituto Nacional de la Pesca INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias Biológicas INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ, S.A. DE C.V. JUGOS DEL VALLE, S.A. DE C.V. LECHE INDUSTRIALIZADA CONASUPO, S.A. DE C.V. LICONSA SIGMA ALIMENTOS, S.A. DE C.V. SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C. NORMEX INDICE   0.      INTRODUCCION   1.      OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION   2.      FUNDAMENTO   3.      REFERENCIAS   4.      DEFINICIONES   5.      SIMBOLOS Y ABREVIATURAS   6.      REACTIVOS Y MATERIALES   7.      APARATOS E INSTRUMENTOS   8.      PROCEDIMIENTO   9.      CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 10.     BIBLIOGRAFIA 11.     OBSERVANCIA DE LA NORMA 12.     VIGENCIA 0. Introducción Esta norma está orientada a proporcionar las guías generales para la preparación de diluciones para el examen microbiológico de alimentos. En vista de la gran cantidad de productos en este campo de aplicación, estas guías pueden ser inapropiadas para todos ellos en forma detallada y para otros requerirse otros métodos diferentes. Sin embargo, en todos los casos donde sea posible se recomienda apegarse a estas guías y modificarse únicamente cuando sea necesario. La dilución primaria tiene por objeto obtener una distribución lo más uniforme posible de los microorganismos contenidos en la muestra destinada para el análisis. La preparación de diluciones decimales adicionales, si son necesarias, tiene como objetivo reducir el número de microorganismos por unidad de volumen, para permitir, después de la incubación, la observación de la prueba en el caso de tubos o matraces y la cuenta de colonias en el caso de placas. 1. Objetivo y campo de aplicación 1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el procedimiento para la preparación de diluciones para el análisis microbiológico de productos alimenticios. 1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que se dedican a efectuar este método en alimentos nacionales o de importación, para fines oficiales. 2. Fundamento Se basa en la preparación de diluciones primarias, para obtener una distribución lo más uniforme posible de los microorganismos presentes en la porción de muestra. 3. Referencias Esta norma se complementa con lo siguiente: NOM-109-SSA1-1994                   Procedimientos para la toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. [dccxl] * 4. Definiciones Para fines de esta norma se entiende por: 4.1 Dilución primaria, es la solución, suspensión o emulsión obtenida después de pesar o medir una cantidad del producto bajo examen y mezclarla con una cantidad de nueve veces en proporción de diluyente. 4.2 Diluciones decimales adicionales, las suspensiones o soluciones obtenidas al mezclar un determinado volumen de la dilución primaria con un volumen de nueve veces un diluyente y que por repetición de esta operación con cada dilución así preparada, se obtiene la serie de diluciones decimales adecuadas para la inoculación de medios de cultivo. 5. Símbolos y abreviaturas Cuando en esta norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende por: cm                                 centímetro mm                               milímetro g                                    gramos ml                                  mililitro l                                      litro pH                                 potencial de hidrógeno N                                    normal °C                                  grado Celsius %                                   por ciento h                                    hora 6. Reactivos y materiales 6.1 Reactivos Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada. 6.1.1 Preparación de reactivos 6.1.1.1 Solución de hidróxido de sodio 1,0 N FORMULA INGREDIENTES                                                                      CANTIDADES Hidróxido de sodio                                                                                               4,0        g Agua                                                                                                                   100,0        ml Preparación: Disolver el hidróxido de sodio y llevar a 100 ml con agua. 6.1.1.2 Soluciones diluyentes 6.1.1.2.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada). FORMULA INGREDIENTES                                                                      CANTIDADES Fosfato de sodio monobásico                                                                        34,0        g Agua                                                                                                                        1,0        l Preparación: Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de sodio 1,0 N. Llevar a un litro con agua. Esterilizar durante 15 minutos a 121° ± 1,0°C. Conservar en refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un litro con agua (solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121° ± 1,0°C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. 6.1.1.2.2 Agua peptonada FORMULA INGREDIENTES                                                                      CANTIDADES Peptona                                                                                                                  1,0        g Cloruro de sodio                                                                                                  8,5        g Agua                                                                                                                        1,0        l Preparación: Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7 ± 0,1 con hidróxido de sodio 1,0 N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera. Esterilizar a 121 ± 1,0°C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar oscuro a una temperatura entre   0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición. 6.2 Materiales Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 1 ml y 2 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca. Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca. Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc. Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio deberán esterilizarse mediante: Horno, durante 2 h a 170 a 175°C o 1 h a 180°C o Autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1,0°C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por esterilización repetida y éste debe ser químicamente inerte. 7. Aparatos e instrumentos Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C. Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1°C y que mantenga la temperatura a 45 ± 0,5°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristáltico (Stomacher). Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para homogeneizador peristáltico. Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g. 8. Procedimiento 8.1 Preparación de la dilución primaria. 8.1.1 A partir de muestras líquidas: Para muestras líquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc.) en las cuales la distribución de microorganismos es homogénea o fácilmente homogeneizable por medios mecánicos (agitación, etc.). Para muestras congeladas de un alimento originalmente líquido o licuable, fundir por completo en baño   de agua de 40 a 45°C un tiempo máximo de 15 minutos y homogeneizar agitando vigorosamente. Para la parte líquida de una muestra heterogénea la cual sea considerada suficientemente representativa de la muestra total (por ejemplo la fase acuosa de grasas animales y vegetales). 8.1.1.1 Agitar la muestra manualmente con 25 movimientos de arriba a abajo en un arco de 30 cm efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 1 ml de la muestra y diluir con 9 ml del diluyente el cual debe encontrarse a una temperatura similar a ésta, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente. 8.1.1.2 Siempre que la cantidad de muestra lo permita, tomar alícuotas mayores, por ejemplo volúmenes de 10 u 11 ml, diluidos con 90 o 99 ml, de la misma forma que se describió anteriormente 8.1.2 A partir de muestras sólidas o semisólidas. Las muestras sólidas y semisólidas congeladas, deben descongelarse en refrigeración de 4 a 8ºC durante 18 horas y no más de 24 horas antes de proceder a su análisis. 8.1.2.1 Pesar una cantidad de 10 u 11 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plástica estériles de tamaño adecuado. 8.1.2.2 Adicionar un volumen de 90 a 99 ml del diluyente llevado a una temperatura similar a la de la muestra. 8.1.2.3 Operar la licuadora o el homogeneizador peristáltico de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensión completa y homogénea según se indique en la técnica correspondiente para cada alimento. Aún en los equipos más lentos, este tiempo no debe exceder de 2,5 minutos. 8.1.2.4 Permitir que las partículas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada tomando de las capas superiores de la suspensión. Cuando la dilución primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar más diluyente, lo cual debe tomarse en cuenta para las operaciones subsecuentes o expresión de resultados. El homogeneizador peristáltico (Stomacher) puede no ser adecuado para algunos productos (por ejemplo, aquellos con partículas agudas o constituyentes que no se dispersen fácilmente). Debe ser utilizado sólo cuando exista evidencia (publicada o por ensayos comparativos) de que los resultados obtenidos no difieren significativamente con aquellos obtenidos con licuadora. 8.2 Preparación de las diluciones decimales adicionales. 8.2.1 Transferir 1 ml o un múltiplo, por ejemplo, 10 u 11 ml de la dilución primaria 1 + 9 (10 -1 ), en otro recipiente conteniendo nueve veces el volumen del diluyente estéril a la temperatura apropiada, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente. 8.2.2 Mezclar cuidadosamente cada botella de diluyente siempre de la misma manera que se describe en 8.1.1.1. 8.2.3 La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se van a inocular, dependen del número esperado de microorganismos en la muestra, con base a los resultados de análisis previos y de la información que se obtenga del personal de inspección que la haya colectado. En ausencia total de información, trabajar con las diluciones de la primera a la sexta. 8.2.4 Utilizar pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las cajas que se hayan seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe ser menor al 10% de la capacidad total de la pipeta. 8.2.5 Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su capacidad total, escurrir aplicando la punta de la pipeta una sola vez en una área de la caja Petri sin líquido. 8.2.6 Mientras se afora el líquido de la pipeta, la punta de ésta debe apoyarse en el interior del cuello del frasco y mantenerla en posición vertical, para lo cual este último debe inclinarse lo necesario. En estudios donde se busca la presencia o ausencia de una determinada especie de microorganismos en 0,1 ml o 0,1 g, no es necesario preparar diluciones mayores. El criterio para seleccionar las diluciones a preparar de acuerdo con el número de microorganismos esperado es: Para la técnica del número más probable utilizar tres tubos: donde sea posible demostrar el microorganismo en 10 ml de la dilución más alta. Para la técnica de cuenta en placa, considerar aquellas en las que se puedan contar de 25 a 250 colonias en un mínimo de una de tres diluciones en el método de cuenta de bacterias aerobias en placa. En el caso de otros grupos microbianos, considerar el número especificado de colonias en la Norma Oficial Mexicana correspondiente. 8.3 Duración del procedimiento. En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente antes del análisis y éstas deben ser usadas para inocular el medio de cultivo dentro de los 20 minutos posteriores a su preparación. 9. Concordancia con normas internacionales Esta norma es técnicamente equivalente a la Norma ISO 6887-1983 (E) Microbiology General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination. International Organization for Standardization. 10. Bibliografía 10.1 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 1992. Ley Federal sobre Metrología y Normalización. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 10.2 Secretaría de Salud. 1984. Ley General de Salud. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 10.3 Secretaría de Salud. 1988. Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 10.4 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. NOM-008-SCFI-1993. Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida. 10.5 Norma ISO 6887-1983 (E). Microbiology General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination. International Organization for Standardization. 10.6 NORMA-Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas. (Secretaría de Comercio y Fomento Industrial.) 10.7 Bacteriological Analitycal Manual. 1984. Food and Drugs Administration FDA. Bureau of Foods. Division of Microbiology. 6a. Ed. Washington, D.C. 10.8 Vanderzant F., Carland S., y Don F. 1992. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. American Public Health Association. Washington, D.C. 11. Observancia de la norma La vigilancia del cumplimiento de la presente norma corresponde a la Secretaría de Salud. 12. Vigencia La presente Norma Oficial Mexicana entrará en vigor con su carácter de obligatorio a los 30 días siguientes a partir de su publicación en el Diario Oficial de la Federación. Sufragio Efectivo. No Reelección. México, D.F., a 10 de mayo de 1995.- El Director General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, José Meljem Moctezuma .- Rúbrica. ## PROYECTO de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico. Tipo de publicación: proyecto Relación con la ficha: historial Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4728916 [Documento con formato](/normas/nom-110-ssa1-1994/documentos/dof-4728916/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes. PROYECTO de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico.   Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.-Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario.   MERCEDES JUAN LOPEZ, Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en el artículo 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 3 fracción XXII, 13, 194 fracción I , 197, 401 Bis, 401 Bis 1, 401 Bis 2 de la Ley General de Salud; 3 fracción XI, 38 fracción II, 40 fracción I, VI, VIII, XI, XIII; 41, 43, 44, 45, 47, 50, 53 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y los aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud me permito ordenar la publicación en el    Diario Oficial de la Federación del proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. El presente proyecto de Norma Oficial Mexicana se publica a efecto de que los interesados dentro de los siguientes 90 días naturales, contados a partir de la fecha de su publicación presenten sus comentarios ante el Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sito en Lieja No. 7, 1er. piso, colonia Juárez, código postal 06696, México, D.F. Durante el plazo mencionado, los análisis que sirvieron de base para la elaboración del proyecto de Norma estarán a disposición del público para su consulta en el domicilio del Comité. México, Distrito Federal, a 26 de mayo de 1994. PREFACIO En la elaboración de la presente Norma participaron los siguientes organismos e instituciones: SECRETARIA DE SALUD Dirección   General   de   Control   Sanitario   de   Bienes   y Servicios Laboratorio Nacional de Salud Pública SECRETARIA DE PESCA Instituto Nacional de la Pesca INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias Biológicas INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ, S.A. DE C.V. JUGOS DEL VALLE, S.A. DE C.V. LECHE   INDUSTRIALIZADA   CONASUPO,   S.A.   DE   C.V.   LICONSA SIGMA ALIMENTOS, S.A. DE C.V. SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C. NORMEX INDICE 0        INTRODUCCION 1        OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION 2        FUNDAMENTO 3        REFERENCIAS 4        DEFINICIONES 5        SIMBOLOS Y ABREVIATURAS 6        REACTIVOS Y MATERIALES 7        APARATOS E INSTRUMENTOS 8        PROCEDIMIENTO 9        OBSERVANCIA DE LA NORMA 10      CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 11      BIBLIOGRAFIA 0 Introducción Esta Norma está orientada a proporcionar las guías generales para la preparación de diluciones para el examen microbiológico de alimentos. En vista de la gran cantidad de productos en este campo de aplicación, estas guías pueden ser inapropiadas para todos ellos en forma detallada y para otros requerirse otros métodos diferentes. Sin embargo, en todos los casos donde sea posible se recomienda apegarse a estas guías y modificarse únicamente cuando sea necesario. La dilución primaria tiene por objeto obtener una distribución lo más uniforme posible de los microorganismos contenidos en la muestra destinada para el análisis. La preparación de diluciones decimales adicionales, si son necesarias, tiene como objetivo reducir el número de microorganismos por unidad de volumen, para permitir, después de la incubación, la observación de la prueba en el caso de tubos o matraces y la cuenta de colonias en el caso de placas. 1   Objetivo y campo de aplicación 1.1   Esta Norma Oficial Mexicana establece   el procedimiento para la preparación de diluciones para el análisis microbiológico de productos alimenticios. 1.2   Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el Territorio Nacional para las personas físicas o morales que se dedican a efectuar este método en alimentos nacionales y de importación. 2   Fundamento Se basa en la preparación de diluciones primarias, para obtener una distribución lo más uniforme posible de los microorganismos presentes en la porción de muestra. 3   Referencias Esta Norma se complementa con lo siguiente: NOM-109-SSA1-1994   Procedimientos para la toma, manejo y transporte de muestras de alimentos para su análisis microbiológico. * NOM-008-SCFI-1993    Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 4   Definiciones Para fines de esta Norma se entiende por: 4.1   Dilución primaria, es la solución, suspensión o emulsión obtenida después de pesar o medir una cantidad del producto bajo examen y mezclarla con una cantidad de nueve veces en proporción de diluyente. 4.2   Diluciones decimales adicionales, las suspensiones o soluciones obtenidas al mezclar un determinado volumen de la dilución primaria con un volumen de nueve veces un diluyente y que por repetición de esta operación con cada dilución así preparada, se obtiene la serie de diluciones decimales adecuadas para la inoculación de medios de cultivo. 5   Símbolos y abreviaturas cm                             centímetro mm                           milímetro g                                gramos ml                              mililitro l                                  litro pH                             potencial de hidrógeno N                                normal °C                              grado Celsius %                               porciento * "Proyecto   de   Norma   Oficial    Mexicana   en    proceso   de   publicación". 6   Reactivos y Materiales 6.1   Reactivos. Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada. 6.1.1   Preparación de reactivos. 6.1.1.1   Solución de hidróxido de sodio 1,0 N.                                    FORMULA Hidróxido de sodio                                                                      4 g Agua                                                                                          100 ml Preparación: Disolver el hidróxido de sodio y aforar a 100 ml con agua. 6.1.1.2     Soluciones diluyentes 6.1.1.2.1   Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada).                                      FORMULA KH 2 PO 4                                                                                                                                    34 g Agua                                                                                               1,0 l Preparación: Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con   solución de hidróxido de sodio 1,0 N. Aforar con agua a un litro. Esterilizar    durante    15    minutos    a   121°C. Conservar en refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un   litro   con   agua (solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. 6.1.1.2.2   Agua peptonada                                                                  FORMULA Peptona                                                                                         1 g Cloruro de sodio                                                                          8,5 g Agua                                                                                               1,0 l Preparación: Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7 con hidróxido de sodio 1,0 N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera. Esterilizar a 121 °C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales   de   la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre   0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición. 6.2   Materiales. Pipetas bacteriológicas   para   distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 11 y 2 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca. Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca. Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc. Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio deberán esterilizarse mediante: Horno, durante 2 horas a 170 a 175°C. Autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1°C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por esterilización repetida y éste debe ser químicamente inerte. 7   Aparatos e instrumentos Horno   para   esterilizar   que   alcance   una   temperatura   mínima de 170°C.    Autoclave con termómetro y manómetro, calibrado con   termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1°C y que mantenga la temperatura a 45 ± 0,5°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristáltico (Stomacher). Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para Stomacher. Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g. 8   Procedimiento 8.1   Preparación de la dilución primaria. 8.1.1   A partir de muestras líquidas: Para muestras líquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc.) en las cuales la distribución de microorganismos es homogénea o fácilmente homogeneizable por medios mecánicos (agitación, etc.) Para muestras congeladas de un alimento originalmente líquido o licuable, fundir por completo en baño de agua de 40 a 45°C un tiempo máximo de 15 minutos y homogeneizar agitando vigorosamente. Para la parte líquida de una muestra heterogénea la cual sea considerada suficientemente representativa de la muestra total (por ejemplo la fase acuosa de grasas animales y vegetales). 8.1.1.1   Agitar la muestra manualmente con 25 movimientos de arriba a abajo en un arco de 30 cm efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 1 ml de la muestra y diluir con 9 ml del diluyente el cual debe encontrarse a una temperatura similar a ésta, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente. 8.1.1.2   Siempre que la cantidad de muestra lo permita, tomar alícuotas mayores, por ejemplo volúmenes de 10 u 11 ml, diluidos con 90 o 99 ml, de la misma forma que se describió anteriormente. 8.1.2   A partir de muestras sólidas o semisólidas. Las muestras sólidas y semisólidas congeladas, deben descongelarse en refrigeración de 4 a 8°C durante 18 horas y no más de 24 horas antes de proceder a su análisis. 8.1.2.1   Pesar una cantidad de 10 u 11 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plástica estériles de tamaño adecuado. 8.1.2.2   Adicionar un volumen de 90 a 99 ml del diluyente llevado a una temperatura similar a la de la muestra. 8.1.2.3   Operar la licuadora o el homogeneizador peristáltico de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensión completa y homogénea según se indique en la técnica correspondiente para cada alimento. Aun en los equipos más lentos, este tiempo no debe exceder de 2,5 minutos. 8.1.2.4   Permitir que las partículas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada tomando de las capas superiores de la suspensión. Cuando la dilución primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar más diluyente, lo cual debe tomarse en cuenta para las operaciones subsecuentes y/o expresión de resultados. El homogeneizador peristáltico (Stomacher) puede no ser adecuado para algunos productos (por ejemplo, aquellos con partículas agudas o constituyentes que no se dispersen fácilmente). Debe ser utilizado sólo cuando exista evidencia (publicada o por ensayos comparativos) de que los resultados obtenidos no difieren significativamente con aquellos obtenidos con licuadora. 8.2   Preparación de las diluciones decimales adicionales. 8.2.1 Transferir 1 ml (o un múltiplo, por ejemplo, 10 u 11 ml de la solución primaria 1 + 9 (10 -1 ) en otro recipiente conteniendo nueve veces el volumen del diluyente estéril a la temperatura apropiada, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente. 8.2.2 Mezclar cuidadosamente cada botella de diluyente siempre de la misma manera que se describe en 8.1.1.1. 8.2.3   La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se van a inocular, dependen del número esperado de microorganismos en la muestra, en base a los resultados de análisis previos y de la información que se obtenga del personal de inspección que la haya colectado, en ausencia total de información, trabajar con todas las diluciones de la primera a la sexta. 8.2.4 Utilizar pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las cajas que se hayan seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe ser menor al 10% de la capacidad total de la pipeta. 8.2.5   Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su capacidad total, escurrir aplicando la punta de la pipeta una sola vez en una área de la caja Petri sin líquido. 8.2.6   Mientras se afora el líquido de la pipeta, la punta de ésta debe aplicarse en el interior del cuello del frasco y mantenerse en posición vertical, para lo cual este último debe inclinarse lo necesario. En estudios donde se busca la presencia o ausencia de una determinada especie de microorganismos en 0,1 ml o 0,1 g, no es necesario preparar mayores diluciones. El criterio para seleccionar las diluciones a preparar de acuerdo con el número de microorganismos esperado es: Para la técnica del número más probable utilizar tres   tubos: donde sea posible demostrar el microorganismo en 10 ml de la dilución más alta. Para la técnica de cuenta en placa, considerar aquellas en las que se puedan contar de 25 a 250 colonias en un mínimo de una de tres diluciones en el método de cuenta de bacterias aerobias en placa. En el caso de otros grupos microbianos, considerar el número especificado de colonias en la Norma Oficial Mexicana para dicho grupo. 8.3   Duración del procedimiento. En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente antes del análisis y éstas deben ser usadas para inocular el medio de cultivo dentro de los 20 minutos posteriores a su preparación. 9   Observancia de la Norma La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud. 10   Concordancia con normas internacionales Esta Norma es técnicamente equivalente a la Norma ISO 6887-1983 (E) Microbiology General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination. International Organization for Standardization. 11   Bibliografía 11.1   Bacteriological Analitycal Manual. 1984. Food and Drugs Administration FDA. Bureau of Foods. Division   of Microbiology. 6 a Washington D.C. 11.2   Norma ISO 6887-1983 (E). Microbiology General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination. International Organization for Standardization. 11.3 NORMA-Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 11.4   Vanderzant F., Carland S., y Don F. 1992. Compendium of   Methods for the Microbiological Examination of Foods. American Public Health   Association.   Washington, D.C. ## RESPUESTA a los comentarios respecto del Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico. Tipo de publicación: respuestas Relación con la ficha: historial Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4868292 [Documento con formato](/normas/nom-110-ssa1-1994/documentos/dof-4868292/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes.     Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. RESPUESTA A LOS COMENTARIOS RESPECTO DEL PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994. BIENES Y SERVICIOS. "PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO", publicado en el   Diario Oficial de la Federación el 15 de agosto de 1994. La Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por conducto del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 1o., 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, ordena la publicación de respuesta a los comentarios recibidos al Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994. Bienes y Servicios. "Preparación y dilución de muestras para su análisis microbiológico". PROMOVENTE                                                                                  RESPUESTA Sabritas, S.A. de C.V.                                      En el apartado relativo a introducción no se acepta la Pepsico de México                                           modificación al texto por ser comprensible y con respecto a Grupo Gamesa, S.A.                                       señalar la obligatoriedad para fines oficiales se incluirá en Asociación Nacional de                                  el campo de aplicación. Fabricantes de Galletas y Pastas Alimenticias   Sabritas, S.A. de C.V.                                      En el punto 1.2 relativo al campo de aplicación se acepta Pepsico de México                                           incluir el texto "para fines oficiales". Grupo Gamesa, S.A En las fórmulas de los reactivos se acepta incluir dos columnas con los títulos de ingredientes y cantidades, señalándose el nombre químico de cada uno de ellos y la cantidad utilizada respectivamente y se homogeneizará el número de decimales en las cantidades. Normex                                                               En el apartado 2 relativo   a fundamento no se acepta la propuesta, porque el principio de la prueba es la preparación de diluciones primarias a partir de la muestra y las diluciones decimales que se efectúan sólo son en caso necesario, además esto se contempla en la introducción del documento. Sabritas, S.A. de C.V.                                      En el punto 6.1.1.2.2 relativo a reactivos, no se acepta Pepsico de México                                           manejar un intervalo de pH de ± 0,2 en la preparación de Grupo Gamesa, S.A.                                       peptona, sólo se permitirá una tolerancia de ± 0,1                                                          Asociación Nacional de Fabricantes           En el punto 6.2 relativo   a   materiales, se acepta emplear de Galletas                                                        como alternativa de esterilización por horno la temperatura de 180ºC por 1 hora y se acepta la conjunción "o" para la esterilización según sea el caso. Normex                                                               En el apartado 7 relativo a aparatos e instrumentos se acepta ampliar las características del baño de agua, manteniendo la redacción "que mantenga la temperatura 45 ± 0.5ºC y en lo relativo a las bolsas estériles, se acepta considerar el nombre del equipo al que son destinadas, "homogeneizador peristáltico". En el punto 8.2.1 relativo a procedimiento preparación de las diluciones decimales, se acepta la propuesta de cambiar solución por dilución. En el punto 8.2.3 y 8.2.6 relativo a procedimiento (preparación de las diluciones decimales) se acepta la modificación en la redacción para mejor comprensión del documento. Asimismo la Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios consideró necesario incluir modificaciones indispensables para la comprensión de la Norma Oficial Mexicana, como las siguientes: En el apartado de Referencias la NOM-008-SCFI-1993. Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial, se omite trasladándose al apartado de Bibliografía, por ser una Norma de consulta y no de complementación. Se sustituye el texto "Proyecto de Norma Oficial Mexicana en proceso de publicación" por "Proyecto en proceso de expedición como Norma Oficial Mexicana". En el apartado de Reactivos y Materiales se adiciona una   tolerancia de ± 1,0 ºC a la temperatura de esterilización por autoclave. Adicionalmente se sustituye el texto de "aforar a" por "llevar a". Reubicación del apartado de Observancia de la Norma, e inclusión del Apartado de Vigencia y como resultado modificación del índice y la numeración de apartados. Cabe mencionar que todas las modificaciones realizadas son para mejor comprensión de la Norma Oficial Mexicana, respetándose el contenido tal y como fue concertada. Atentamente Sufragio Efectivo. No Reelección. México, D.F., a 20 de diciembre de 1994.- El Director General, José Meljem Moctezuma .- Rúbrica.       ## CONTINUACION de las respuestas a los comentarios recibidos, respecto del Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico. Tipo de publicación: otra_publicacion Relación con la ficha: historial Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4875487 [Documento con formato](/normas/nom-110-ssa1-1994/documentos/dof-4875487/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes.     Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. CONTINUACION DE RESPUESTAS A LOS COMENTARIOS RESPECTO DEL PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994. BIENES Y SERVICIOS. PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO, publicado en el Diario Oficial de la Federación el 15 de agosto de 1994. La Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por acuerdo del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 1o., 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, ordena la publicación de la continuación de las respuestas a los comentarios recibidos al Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994. BIENES Y SERVICIOS. PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANALISIS MICROBIOLOGICO. La Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, en base a los comentarios expresados por el Subcomité de Control Sanitario de Bienes y Servicios consideró necesario efectuar las siguientes modificaciones: En el apartado de Prefacio se actualiza el nombre de la Secretaría de Pesca. En el apartado relativo a Símbolos y Abreviaturas se incluye el texto introductorio de acuerdo con la Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas. En el segundo párrafo del punto 8.1.2.4 se sustituye "y/o" por "o". Atentamente Sufragio Efectivo. No Reelección. México, D.F., a 13 de marzo de 1995.- El Director General, José Meljem Moctezuma .- Rúbrica.