# NOM-113-SSA1-1994 Bienes y servicios Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. Fuente: https://platiica.economia.gob.mx/normalizacion/nom-113-ssa1-1994/ Estado informado por la fuente: Vigente Disponibilidad local: texto - > Enlace al último Informe de revisión: - Clave de la Norma: NOM-113-SSA1-1994 - Comité que desarrolló la Norma: Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario - Dependencia(s): Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios - Estado de la Norma: Vigente - Fecha de entrada en vigor: 24/9/1995 - Fecha de publicación en el DOF: 25/8/1995 - Grado: No equivalente - Producto, servicio, proceso o sistema: Cuenta de microorganismos coliformes totales - Título de la Norma: Bienes y servicios Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. ## PDF enlazado por la ficha oficial Tipo de publicación: pdf Relación con la ficha: principal Fuente del documento: https://platiica.economia.gob.mx/wp-content/uploads/sites/2/PDF_Normas_Publicas/113-ssa1.pdf Recuperación pendiente o parcial; consultar el archivo y la fuente original. ## NORMA Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. Tipo de publicación: norma Relación con la ficha: principal Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4880115 [Documento con formato](/normas/nom-113-ssa1-1994/documentos/dof-4880115/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes.     Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. JOSE MELJEM MOCTEZUMA, Director General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por acuerdo del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 38 fracción II, 47 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 194 fracción I de la Ley General de Salud; 2o. fracción III, 34, 37, 40 y demás aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; 8o. fracción IV y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, y CONSIDERANDO Que con fecha 28 de abril de 1994, en cumplimiento de lo previsto en el artículo 46 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización la Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios presentó al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana. Que con fecha 15 de agosto de 1994, en cumplimiento del acuerdo del Comité y lo previsto en el artículo 47 fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, se publicó en el Diario Oficial de la Federación el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana a efecto que dentro de los siguientes noventa días naturales posteriores a dicha publicación, los interesados presentaran sus comentarios al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario. Que en fecha previa, fueron publicados en el Diario Oficial de la Federación las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comité, en términos del artículo 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. Que en atención a las anteriores consideraciones, contando con la aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, se expide la siguiente: NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. METODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA. PREFACIO En la elaboración de la presente Norma participaron los siguientes organismos e instituciones: SECRETARIA DE SALUD Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios Laboratorio Nacional de Salud Pública SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA Y DESARROLLO RURAL Comisión Nacional del Agua SECRETARIA DE MEDIO AMBIENTE, RECURSOS NATURALES Y PESCA Instituto Nacional de la Pesca INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias Biológicas INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ, S.A. DE C.V. JUGOS DEL VALLE, S.A. DE C.V. LABORATORIO FERMI, S.A. LABORATORIO ICCABI, S.A. DE C.V. LECHE INDUSTRIALIZADA CONASUPO, S.A. DE C.V. LICONSA SIGMA ALIMENTOS, S.A. DE C.V. SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C. NORMEX INDICE   0.      INTRODUCCION   1.      OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION   2.      FUNDAMENTO   3.      REFERENCIAS   4.      DEFINICIONES   5.      SIMBOLOS Y ABREVIATURAS   6.      REACTIVOS Y MATERIALES   7.      APARATOS E INSTRUMENTOS   8.      PREPARACION DE LA MUESTRA   9.      PROCEDIMIENTO 10.     EXPRESION DE LOS RESULTADOS 11.     INFORME DE LA PRUEBA 12.     CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 13.     BIBLIOGRAFIA 14.     OBSERVANCIA DE LA NORMA 15.     VIGENCIA 0. Introducción El grupo de los microorganismos coliformes es el más ampliamente utilizado en la microbiología de los alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas. El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para: La detección de prácticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricación de los alimentos. La evaluación de la calidad microbiológica de un producto, aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario. Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas del equipo. La calidad sanitaria del agua y hielo utilizados en las diferentes áreas del procesamiento de alimentos. La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivos líquidos o sólidos con características selectivas o diferenciales. 1. Objetivo y campo de aplicación 1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa. 1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales o de importación, para fines oficiales. 2. Fundamento El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares. 3. Referencias Esta Norma se complementa con lo siguiente: NOM-109-SSA1-1994                    Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. [cdv] * NOM-110-SSA1-1994                    Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico. [cdvi] * NOM-092-SSA1-1994                    Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. [cdvii] * NOM-112-SSA1-1994                    Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más Probable. [cdviii] * 4. Definiciones Para fines de esta Norma se entiende por: Coliformes, bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que a 35 ºC fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares. 5. Símbolos y abreviaturas Cuando en esta Norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende por: h                                              hora g                                              gramo ml                                            mililitro l                                                litro mm                                         milímetro ºC                                            grado Celsius %                                             por ciento pH                                           potencial de hidrógeno N                                              normal RVBA                                      agar-rojo-violeta-bilis-lactosa 1/d                                           inversa de la dilución UFC                                        unidades formadoras de colonias /                                                por 6. Reactivos y materiales 6.1 Reactivos Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico y cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada. 6.1.1 Soluciones diluyentes 6.1.1.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)                                                        FORMULA INGREDIENTES                                                                               CANTIDADES Fosfato monopotásico                                                                          34,0 g Agua                                                                                                         1,0 l Preparación: Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de sodio 1,0 N. Llevar con agua a un litro. Esterilizar a 121± 1,0°C durante 15 minutos. Conservar en refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un litro con agua (solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar durante 15 minutos a 121± 1,0°C. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales. 6.1.1.2 Agua peptonada                                                        FORMULA INGREDIENTES                                                                               CANTIDADES Peptona                                                                                                   1,0 g NaCl                                                                                                         8,5 g Agua                                                                                                         1,0 l Preparación: Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio 1,0 N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera. Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1,0°C. Después de la esterilización, los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición. 6.1.2 Medio de cultivo Agar-rojo- violeta-bilis-lactosa (RVBA)                                                        FORMULA INGREDIENTES                                                                               CANTIDADES Peptona                                                                                                   7,0 g Extracto de levadura                                                                              3,0 g Lactosa                                                                                                    10,0 g Sales biliares                                                                                         1,5 g Cloruro de sodio                                                                                    5,0 g Rojo neutro                                                                                             0,03 g Cristal violeta                                                                                          0,002 g Agar                                                                                                          15,0 g Agua                                                                                                        1,0 l Preparación: Mezclar los componentes en el agua y dejar reposar durante algunos minutos. Mezclar perfectamente y ajustar el pH a 7,4 con ácido clorhídrico 0,1N o con hidróxido de sodio 0,1N a 25°C, de forma que después del calentamiento se mantenga en este valor. Calentar con agitación constante y hervir durante 2 minutos. Enfriar inmediatamente el medio en un baño de agua hasta que llegue a 45°C. Evitar el sobrecalentamiento del medio. No debe esterilizarse en autoclave. Usar el medio dentro de las tres primeras horas después de su preparación. En el caso de utilizar medio de cultivo deshidratado, seguir las instrucciones del fabricante. 6.2 Materiales Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 11 y 2 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca. Tubos de 16 X 150 mm con tapón de rosca. Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc. Cajas Petri. Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante: Horno, durante 2 h a 170 - 175°C, o 1 h a 180°C; o en autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1,0°C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por las esterilizaciones repetidas y éste debe ser químicamente inerte. 7. Aparatos e instrumentos Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C. Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1° C y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristáltico (Stomacher). Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para homogeneizador peristáltico. Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0° C, provista con termómetro calibrado. Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente amplificador. Registrador mecánico o electrónico. Microscopio óptico. Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C. 8. Preparación de la muestra La preparación de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994 "Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico". 9. Procedimiento 9.1 Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril. 9.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución. 9.3 Vertir de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1,0°C en baño de agua. En el caso de utilizar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15 ml del medio. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos. 9.4 Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj, seis movimientos en el sentido contrario al de las manecillas del reloj y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa y nivelada. Permitir que la mezcla solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría. 9.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad. 9.6 Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique. 9.7 Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas. 9.8 Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador de colonias. 9.9 Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias típicas son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un halo de precipitación debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la morfología colonial es semejante a lentes biconvexos con un diámetro de 0,5 a 2,0 mm. 10. Expresión de los resultados 10.1 Cálculo del método 10.1.1 Placas que contienen entre 15 y 150 colonias características. Separar las placas que contienen el número antes mencionado de colonias características en dos diluciones consecutivas. Contar las colonias presentes. Calcular el número de coliformes por mililitro o por gramo de producto, multiplicando el número de colonias por el inverso de la dilución correspondiente, tomando los criterios de la NOM-092-SSA1-1994. Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. 10.1.2 Placas que contienen menos de 15 colonias características. Si cada una de las placas tiene menos de 15 colonias características, reportar el número obtenido seguido de la dilución correspondiente. 10.1.3 Placas con colonias no características. Si en las placas no hay colonias características, reportar el resultado como: menos de un coliforme por 1/d por gramo, en donde d es el factor de dilución. 11. Informe de la prueba Informar: UFC/g o ml en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35°C durante 24 ± 2 h. En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar utilizando como referencia la dilución más baja utilizada, por ejemplo dilución 10 -1 . En caso de no observar crecimiento en la muestra sin diluir se informa: "no desarrollo de coliformes por ml". 12. Concordancia con normas internacionales Esta Norma no tiene concordancia con normas internacionales. 13. Bibliografía 13.1 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 1992. Ley Federal sobre Metrología y Normalización. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 13.2 Secretaría de Salud. 1984. Ley General de Salud. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 13.3 Secretaría de Salud. 1988. Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios. Diario Oficial de la Federación . México, D.F. 13.4 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. NOM-008-SCFI-1993. Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida. México, D.F. 13.5 International Organization for Standarization. 1991: "Norma ISO 4832-1991. Microbiology-General Guidance for the Enumeration of Coliforms- Colony Count Technique". 13.6 Food and Drugs Administration. 1984: "Bacteriological Analitycal Manual". Bureau of Foods. Division of Microbiology. 6 a Ed. Washington D.C. 13.7 Secretaría de Salud. Laboratorio Nacional de Salud Pública: "Manuales para la determinación de organismos coliformes totales". México, D.F. 13.8 Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. 1981. NORMA-Z-013/02: "Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas". México, D.F. 14. Observancia de la Norma La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud. 15. Vigencia La presente Norma Oficial Mexicana entrará en vigor con su carácter de obligatorio a los 30 días siguientes a partir de su publicación en el Diario Oficial de la Federación . Sufragio Efectivo. No Reelección. México, D.F., a 10 de mayo de 1995.- El Director General, José Meljem Moctezuma .- Rúbrica. ## PROYECTO de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. Tipo de publicación: proyecto Relación con la ficha: historial Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4728930 [Documento con formato](/normas/nom-113-ssa1-1994/documentos/dof-4728930/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes. PROYECTO de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa.   Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.-Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario.   MERCEDES JUAN LOPEZ, Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en el artículo 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 3 fracción XXII, 13, 194 fracción I , 197, 401 Bis, 401 Bis 1, 401 Bis 2 de la Ley General de Salud; 3 fracción XI, 38 fracción II, 40 fracción I, VI, VIII, XI, XIII; 41, 43, 44, 45, 47, 50, 53 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y los aplicables del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud me permito ordenar la publicación en el    Diario Oficial de la Federación del proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1993, Bienes y Servicios. Método para la Cuenta de Microorganismos Coliformes Totales en Placa. El presente proyecto de Norma Oficial Mexicana se publica a efecto de que los interesados dentro de los siguientes 90 días naturales, contados a partir de la fecha de su publicación, presenten sus comentarios ante el Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sito en Lieja No. 7, 1er. piso, colonia Juárez, código postal 06696, México, D.F. Durante el plazo mencionado, los análisis que sirvieron de base para la elaboración del proyecto de Norma estarán a disposición del público para su consulta en el domicilio del Comité. México, Distrito Federal, a 26 de mayo de 1994. PREFACIO En la elaboración de la presente Norma participaron los siguientes Organismos e Instituciones: SECRETARIA DE SALUD Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios Laboratorio Nacional de Salud Pública SECRETARIA DE PESCA Instituto Nacional de la Pesca SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS Comisión Nacional del Agua INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL Escuela Nacional de Ciencias Biológicas INDUSTRIAS VINICOLAS PEDRO DOMECQ, S.A. DE C.V. JUGOS DEL VALLE, S.A. DE C.V. LECHE INDUSTRIALIZADA CONASUPO, S.A. DE C.V., LICONSA SIGMA ALIMENTOS, S.A. DE C.V. LABORATORIO ICCABI, S.A. DE C.V. LABORATORIO FERMI, S.A. SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACION Y CERTIFICACION, S.C., NORMEX INDICE   0 INTRODUCCION   1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION   2 FUNDAMENTO   3 REFERENCIAS   4 DEFINICIONES   5 SIMBOLOS Y ABREVIATURAS   6 REACTIVOS Y MATERIALES   7 APARATOS E INSTRUMENTOS   8 PREPARACION DE LA MUESTRA   9 PROCEDIMIENTO 10 EXPRESION DE RESULTADOS 11 INFORME DE LA PRUEBA 12 OBSERVANCIA DE LA NORMA 13 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 14 BIBLIOGRAFIA 0 INTRODUCCION El grupo de los microorganismos colifornes es el más ampliamente utilizado en la microbiología de los alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas. El uso de los coliformes como indicador sanitario puede ser aplicado a: Prácticas sanitarias deficientes tanto en el manejo como en la fabricación de los alimentos. La calidad microbiológica de un producto, lo que no necesariamente implica un riesgo sanitario. Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas del equipo. Calidad del agua y hielo utilizados en las diferentes áreas del procesamiento de alimentos. La demostración y la cuenta de microorganismos coliformes puede realizarse mediante el empleo de cultivos líquidos o sólidos con características selectivas o diferenciales. 1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION 1.1 Esta Norma Oficial establece el método microbiológico para determinar el número de microorganismos coliformes totales presentes en productos alimenticios por medio de la técnica de cuenta en placa. 1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que requieran efectuar este método en productos nacionales y de importación. 2 FUNDAMENTO Por esta técnica se efectúa la cuenta de microorganismos coliformes, utilizando el método de vaciado en placa con agar rojo violeta bilis , el cual es un medio selectivo en donde las bacterias se desarrollan a 35° C durante 24 a 48 horas, fermentando la lactosa, dando como resultado la producción de gas y ácidos, los cuales viran el indicador de pH presente en el medio y precipitan las sales biliares. 3 REFERENCIAS Esta Norma se complementa con lo siguiente: NOM-008-SCFI-1993        Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida.                                     Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. NOM-109-SSA1-1994       Procedimiento para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos                                     para su Análisis Microbiológico. * NOM-110-SSA1-1994       Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis                                     Microbiológico. * NOM-092-SSA1-1994       Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. * NOM-112-SSA1-1994       Determinación de Bacterias Coliformes. Técnica del Número más                                     Probable. * 4 DEFINICIONES Para fines de esta Norma se entiende por: Coliformes, bacterias que a 35°C fermentan la lactosa con formación de ácido, ocasionando en las colonias desarrolladas el vire del indicador rojo neutro presente en el medio y la precipitación de las sales biliares. 5 SIMBOLOS Y ABREVIATURAS Cuando en esta Norma se haga referencia a las siguientes abreviaturas y símbolos se entiende por: * Proyecto de Norma Oficial Mexicana en proceso de publicación. g                                                                                                        gramo ml                                                                                                      mililitro l                                                                                                          litro mm                                                                                                   milímetro °C                                                                                                      grado Celsius %                                                                                                       por ciento pH                                                                                                     potencial de hidrógeno N                                                                                                        normal NMP                                                                                                  número más probable RVBA                                                                                                agar-rojo-violeta-bilis-lactosa 1/d                                                                                                     inversa de la dilución 6 REACTIVOS Y MATERIALES 6.1 Reactivos. Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico y cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada. 6.1.1 Soluciones diluyentes. 6.1.1.1 Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada).                                                                     Fórmula Fosfato monopotásico                                                             34 g Agua                                                                                               1,0 l Preparación: Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de sodio 1,0 N. Aforar con agua a un litro. Esterilizar durante 15 minutos a 121°C. Conservar en refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un litro con agua (solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. 6.1.1.2 Agua peptonada.                                                                     Fórmula Peptona                                                                                         1,0 g NaCl                                                                                               8,5 g Agua                                                                                               1,0 l Preparación: Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio 1,0 N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve, según se requiera. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Después de la esterilización, los volúmenes finales de la solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no alteren su volumen o composición. 6.1.2 Medio de cultivo. Agar-rojo- violeta-bilis-lactosa (RVBA)                                                                        Fórmula Peptona                                                                                         7,0 g Extracto de levadura                                                                    3,0 g Lactosa                                                                                       10,0 g Sales biliares                                                                               1,5 g Cloruro de sodio                                                                          5,0 g Rojo neutro                                                                                  0,03 g Cristal violeta                                                                                0,02 g Agar                                                                                              15,0 g Agua                                                                                               1,0 l Preparación: Mezclar los componentes en el agua y dejar reposar durante algunos minutos. Mezclar perfectamente y ajustar el pH a 7,4 con ácido clorhídrico 0,1N o con hidróxido de sodio 0,1N a 25°C, de forma que después del calentamiento se mantenga en este valor. Calentar con agitación constante y hervir durante 2 minutos. Inmediatamente enfriar el medio en un baño de agua hasta que llegue a 45°C. Evitar el sobrecalentamiento del medio. No debe esterilizarse en autoclave. Usar el medio dentro de las tres primeras horas después de su preparación. En el caso de utilizar medio de cultivo deshidratado, seguir las instrucciones del fabricante. 6.2 Materiales. Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 11 y 2 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total. Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca. Tubos de 16 X 150 mm con tapón de rosca. Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc. Cajas Petri. Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio deberán esterilizarse mediante: Horno, durante 2 horas a 170 - 175°C. Autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 ± 1°C. El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por las esterilizaciones repetidas y éste debe ser químicamente inerte. 7 APARATOS E INSTRUMENTOS Horno para esterilizar que alcance una temperatura mínima de 170°C. Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con termómetro de máximas y mínimas. Baño de agua con circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1° C y que mantenga la temperatura a 45 ± 0,5°C. Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un homogeneizador peristálico (Stomacher). Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para Stomacher. Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0° C, provista con termómetro calibrado. Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente amplificador. Registrador mecánico o electrónico. Microscopio óptico. Potenciómetro con una escala mínima de 0,1 unidades de pH a 25 °C. 8 PREPARACION DE LA MUESTRA La preparación de la muestra será de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994 "Preparación y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico". 9 PROCEDIMIENTO 9.1 Colocar por duplicado en cajas Petri 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando para tal propósito una pipeta estéril. 9.2 Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta estéril diferente para cada dilución. 9.3 Verter de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido a 45 ± 1 °C en baño de agua. El tiempo transcurrido entre la preparación de la dilución primaria y el momento en que es vertido el medio de cultivo, no debe exceder de 20 minutos. 9.4 Mezclar cuidadosamente el inóculo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, seis en el sentido de las manecillas del reloj, seis en el sentido contrario y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa. Permitir que la mezcla solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría. 9.5 Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad. 9.6 Después de que está el medio completamente solidificado en la caja, verter aproximadamente 4 ml del medio RVBA a 45 ± 1°C en la superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique. 9.7 Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas. 9.8 Después del periodo especificado para la incubación, contar las colonias con el contador de colonias. 9.9 Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias típicas son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un halo de precipitación debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la morfología colonial es semejante a lentes biconvexos con un diámetro de 0,5 a 2,0 mm. 10 EXPRESION DE RESULTADOS 10.1 Cálculo del método. 10.1.1 Placas que contienen entre 15 y 150 colonias características. Separar las placas que contienen el número antes mencionado de colonias características en dos diluciones consecutivas. Contar las colonias presentes. Calcular el número de coliformes por mililitro o por gramo de producto, multiplicando el número de colonias por el inverso de la dilución correspondiente. 10.1.2 Placas que contienen menos de 15 colonias características. Si cada una de las placas tiene menos de 15 colonias características, reportar el número obtenido seguido de la dilución correspondiente. 10.1.3 Placas con colonias no características. Si en las placas no hay colonias características, reportar el resultado como: menos de un coliforme por 1/d por gramo, en donde d es el factor de dilución. 11 INFORME DE LA PRUEBA Informar: cuenta de microorganismos coliformes en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35°C durante 24 ± 2 hrs. 12 OBSERVANCIA DE LA NORMA La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud. 13 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES Esta Norma no tiene concordancia con normas internacionales. 14 BIBLIOGRAFIA 14.1 Bacteriological Analitycal Manual. 1984. Food and Drugs Administration FDA. Bureau of Foods. Division of Microbiology. 6 a Ed. Washington, D.C. 14.2 Manuales para la Determinación de Organismos Coliformes Totales. Laboratorio Nacional de Salud Pública. Secretaría de Salud. 14.3 Norma ISO 4832-1991. Microbiology-General Guidance for the Enumeration of Coliforms- Colony Count Technique. International Organization for Standardization. 14.4 NORMA-Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las Normas Oficiales Mexicanas. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial. ## RESPUESTA a los comentarios recibidos, respecto del Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. Tipo de publicación: respuestas Relación con la ficha: historial Fuente del documento: https://sidof.segob.gob.mx/notas/docFuente/4869711 [Documento con formato](/normas/nom-113-ssa1-1994/documentos/dof-4869711/) Texto derivado para búsqueda; consultar el documento con formato para tablas e imágenes.     Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. RESPUESTA A LOS COMENTARIOS RESPECTO DEL PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994. BIENES Y SERVICIOS. "METODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA", publicado en el Diario Oficial de la Federación el 15 de agosto de 1994. La Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios, por acuerdo del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 1o., 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización y 13 fracción I del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud, ordena la publicación de respuesta a los comentarios recibidos al Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-113-SSA1-1994. Bienes y Servicios. "Método para la Cuenta de Microorganismos Coliformes Totales en Placa". PROMOVENTE                                              RESPUESTA Sabritas, S.A. de C.V.                                  En el   apartado   referente   a   Introducción Pepsico de México, S.A. de C.V.                no se acepta la   propuesta   en   virtud   de Grupo Gamesa, S.A. de C.V.                     que la Norma contempla al grupo   de Asociación Nacional de Fabricantes       coliformes de manera general como un de Galletas y Pastas Alimenticias,           indicador.   A.C.                                                                 Comité de la Industria de Alimentos. SINALP   Sabritas, S.A. de C.V.                                  En   el   punto   1.2   de   campo    de   Pepsico de México, S.A. de C.V.                aplicación, se acepta incluir el texto "para Grupo Gamesa, S.A. de C.V.                     fines oficiales".   Sabritas, S.A. de C.V. Pepsico de México, S.A. de C.V.   En   el   apartado    5    relativo    a    símbolos   Grupo Gamesa, S.A. de C.V.               y abreviaturas, se acepta la inclusión de Comité de la Industria de                            UFC y se elimina NMP.   Alimentos. SINALP.   Sabritas, S.A. de C.V.                                  En las fórmulas   de   los   reactivos   se Pepsico de México, S.A. de C.V.                acepta incluir    dos    columnas    con    los Grupo Gamesa, S.A. de C.V.                       títulos    de ingredientes   y   cantidades, Normex                                                            señalándose   el nombre químico de cada uno de ellos y la cantidad utilizada,                                                                            respectivamente, y se homogeneizará el número de decimales en las cantidades.   Sabritas, S.A. de C.V.                                  En el punto   6.1.2   no   se   acepta   cambiar Pepsico de México, S.A. de C.V.                el nombre del medio de cultivo (RVBA), Grupo Gamesa, S.A. de C.V.                      puesto que el propuesto es el nombre Asociación Nacional de                             comercial. Fabricantes de Galletas y Pastas Alimentcias. Comité de la Industria de Alimentos. SINALP   Sabritas, S.A. de C.V.                                  En   el   punto   6.2   relativo   a    materiales,   Pepsico de México, S.A.                              se acepta      emplear      como      alternativa Grupo Gamesa, S.A. de C.V                       de esterilización por   horno   la Asociación Nacional de                              temperatura de 180°C por 1 hora y se Fabricantes de Galletas                              acepta la   conjunción "o" para la                                                         esterilización según sea el caso. Sabritas, S.A. de C.V.                                  En   el    punto    9.7    de    Procedimiento    y   Pepsico de México, S.A. de C.V.                el apartado 11 de informe de la prueba, Grupo Gamesa, S.A. de C.V.                      no se acepta incluir la prolongación del Comité de la Industria de                          tiempo   de   incubación,   debido   a   que   Alimentos. SINALP                                      este   grupo    de   bacterias en placa se   IMSS. Subdirección General                     desarrolla a 24 ±   2   h. de Abastacimiento.                                     Se acepta reportar UFC/g o ml. Asociación Nacional de                             Fabricantes de Galletas y Pastas Alimenticias, A.C.   Asociación Nacional de                             En el punto 6.1.2. correspondiente a Fabricantes de Galletas y                           medios de    cultivo    no    se    acepta   Pastas Alimenticias, A.C.                            considerar   las condiciones de esterilidad                                                       ya que en este punto se hace mención de                                                       los cuidados en la preparación del medio de cultivo y además en caso de emplear un medio deshidratado se deben considerar las instrucciones del fabricante.   IMSS, Subdirección General                     En el   apartado   referente   a   Introducción de Abastecimiento. Jefatura                       se aceptan   algunos   cambios   en   la de Servicios de Control de                          redacción para mejorar la comprensión Calidad.                                                            del documento. Normex                                                         En el apartado relativo a fundamento se aceptan algunos cambios de redacción y de carácter técnico para mejor comprensión de la técnica.   IMSS, Subdirección General                     En el   apartado   referente   a   definiciones, de Abastecimiento. Jefatura                       se acepta     complementar     la    definición de Servicios de Control de                         de "coliformes". Calidad.                                                            Comité de la Industria de Alimentos. SINALP Normex                                                           En el apartado de reactivos se acepta modificar la redacción en cuanto a la esterilización de soluciones y medios de cultivo, además en el apartado de aparatos e instrumentos se adiciona un rango de tolerancia de ± 1,0° C a la temperatura de esterilización por autoclave.   IMSS. Subdirección General                     No   se   aceptan   las    unidades    ya    que                                                           de acuerdo a la   NOM-008-SCFI-1993. de Abastecimiento. Jefatura                        Sistema General   de   Unidades   de de Servicios de Control de                          Medida   establece que         para        Calidad.                                                          expresar   temperaturas convencionales Normex                                                           se utilice ° C.                                                         En el punto 6.1.2 relativo a reactivos se acepta la corrección en la cantidad de cristal violeta en la fórmula (0.002 g). Asimismo, no se acepta la tolerancia en el rango de pH de ± 0,1, ya que existe la presencia de un indicador y puede alterar los resultados de la prueba.   Normex                                                           En el apartado 7 se acepta la tolerancia en baño de agua de ± 1,0° C y agregar el texto "con control de temperatura" para las especificaciones de este equipo. No se acepta agregar las características propuestas sobre el material, ya que para los fines microbiológicos no es necesario que cumplan con éstas; y además en aparatos, se acepta sustituir en la parte de vasos para licuadora la palabra "Stomacher" por "homogeneizador peristáltico".   IMSS, Subdirección General                     En   el   apartado   7    referente   a    aparatos   de Abastecimiento. Jefatura                       e instrumentos no   se   aceptan   las de Servicios de Control de                         propuestas Calidad.                                                          de cambio ya que   las   características   de                                                       los aparatos e instrumentos se                                                       adecuaron, reuniendo características                                                         específicas   para cada uno de éstos.   IMSS, Subdirección General                     En el apartado 8   referente   a   la de Abastecimiento. Jefatura                       preparación de la muestra se   acepta de Servicios de Control de                         sustituir la palabra "será" por "debe ser" Calidad.                                                             En    los    puntos    9.1     y     9.3     relativos     a procedimiento     se     acepta     modificar      la redacción.   Normex                                                           En el apartado 9.3, se    acepta    disminuir    el volumen del    medio   de   cultivo    cuando    se utilicen cajas Petri de plástico.   IMSS, Subdirección General                     En el punto 9.4 se acepta incluir de Abastecimiento. Jefatura                       únicamente el      término       "nivelada" de Servicios de Control de                          para         mejor   comprensión. Asimismo, Calidad.                                                         se acepta   incluir las frases "movimientos Comité de la Industria de                           de " y "   de   la   manecilla del reloj". Alimentos. SINALP                                            IMSS, Subdirección General                     En los puntos 9.6,   9.8,   9.9,   10.1.2 y de Abastecimiento. Jefatura                       10.1.3, no   se   acepta   la   redacción de Servicios de Control de                         propuesta por considerarse que la del Calidad.                                                          documento es más explícita.   Normex.                                                          Se acepta incluir en el cálculo del método, la frase "los criterios establecidos en la NOM-092-SSA1-1994. Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa".   Compañía Nestlé, S.A. de C.V.                  En el punto 1.1 referente a objetivo , no se acepta incluir la propuesta. El método de filtración para agua potable, es objeto de otra Norma. En el punto 2 referente a fundamento no se acepta abrir un intervalo de temperatura entre 30º a 35ºC, ya que por definición este grupo de bacterias se desarrolla a 35ºC ± 1º C.   Comité de la Industria de                          En   el   apartado   de   reactivos    y Alimentos. SINALP.                                      materiales   se sustituye el texto "aforar a" por "llevar a". Asimisimo, no se acepta                                                       utilizar el término "aproximadamente" en las soluciones normales ya que el concepto queda muy abierto. 12.0pt;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";color:windowtext'>  Asimismo, la Dirección General de Control Sanitario de Bienes y Servicios consideró necesario incluir modificaciones indispensables para la comprensión de la Norma Oficial Mexicana, como las siguientes: En el apartado de Objetivo y Campo de Aplicación se sustituye la "y" por la "o". En el apartado de Símbolos y Abreviaturas se incluye "hora". En el apartado de Referencias la NOM-008-SCFI-1993. Norma Oficial Mexicana. Sistema General de Unidades de Medida. Secretaría de Comercio y Fomento Industrial, se omite trasladándose al apartado de Bibliografía, por ser una Norma de consulta y no de complementación. Se sustituye el texto "Proyecto de Norma Oficial Mexicana en proceso de publicación" por "Proyecto en proceso de expedición como Norma Oficial Mexicana". Reubicación del apartado de Observancia de la Norma, e inclusión del Apartado de Vigencia y como resultado modificación del índice y la numeración de apartados. Complementación en el apartado 11 del Informe de la prueba. Reubicación del apartado de Observancia de la Norma. Inclusión del apartado de Vigencia. Cabe mencionar que todas las modificaciones realizadas son para mejor comprensión de la Norma Oficial Mexicana, respetándose el contenido tal y como fue concertada. Atentamente Sufragio Efectivo. No Reelección. México, D.F., a 20 de diciembre de 1994.- El Director General, José Meljem Moctezuma .- Rúbrica.